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AChR binding抗體和blocking抗體
更新時(shí)間:2021-08-18   點(diǎn)擊次數(shù):1643次

文章要點(diǎn)

文章將MG分為眼肌型和全身型,發(fā)現(xiàn):

1. AChR binding 和blocking抗體雙陽,基本出現(xiàn)于全身型MG,且抗體雙陽的患者預(yù)后更差,胸腺瘤風(fēng)險(xiǎn)增大

2. blocking單陽均出現(xiàn)于眼肌型MG

3. 研究揭示了抗體滴度和臨床嚴(yán)重程度之間的顯著相關(guān)性。相較于眼肌型MG,全身型MG的AChR-binding和blocking抗體平均滴度都更高。但也存在抗體低滴度的全身型的病例。作者認(rèn)為這反映了AChR抗體的特異性、親和性和同型的異質(zhì)性

4. 亞洲人眼肌型MG多發(fā),可能與抗體類型有關(guān)

5. 兩種抗體的檢測(cè)有助于MG的診斷和預(yù)后

摘要  

    重癥肌無力(MG)是一種自身免疫性疾病與直接作用于神經(jīng)肌肉連接處的突觸后肌肉成分的抗體有關(guān)。乙酰膽堿受體(AChR)抗體反應(yīng)的異質(zhì)性使得AChR抗體被分為3種類型binding(結(jié)合)blocking(阻斷modulating(調(diào)節(jié))抗體。本研究的目的是比較AChR抗體的類型與MG患者的臨床嚴(yán)重程度。


本研究納入的患者均進(jìn)行了binding抗體和blocking抗體檢測(cè),且自診斷以來疾病持續(xù)時(shí)間超過2。根據(jù)美國重癥肌無力基金會(huì)的臨床分類,將患者分為5個(gè)主要類型。同樣,入組患者被分為眼肌型全身型。我們比較了眼肌型全身型的抗體類型和滴度以及胸腺狀態(tài)35例患者符合納入標(biāo)準(zhǔn)。其中16例患者(47%)同時(shí)具有bindingblocking AChR抗體,11例患者(31%)僅具有binding抗體8例患者(22%)僅具有blocking抗體。根據(jù)明確的臨床分型,眼肌型全身型分別為10例和25全身型16例患者同時(shí)具有兩種AChR抗體,其余患者僅顯示binding抗體所有只檢出blocking抗體的患者均分為眼肌型因此,bindingblocking抗體檢測(cè)可能更有助于預(yù)測(cè)MG患者的預(yù)后和診斷。


介紹

重癥肌無力(MG)是一種自身免疫性疾病,與直接作用于神經(jīng)肌肉連接處的突觸后肌肉成分的抗體有關(guān)。在大多數(shù)情況下,它是由抗煙堿乙酰膽堿受體(AChR)致病性自身抗體引起的[1,2]但其他終板蛋白,如肌肉特異性受體酪氨酸激酶(MuSK)[3]或脂蛋白相關(guān)蛋白4 (LRP4)[4,5],可能作為自身免疫性MG的靶點(diǎn)。表現(xiàn)出AChR抗體的個(gè)體通常不表達(dá)單一的單克隆抗體群體。由于AChR抗體反應(yīng)的異質(zhì)性,AChR抗體被分為三種類型binding(結(jié)合)、blocking(阻斷modulating(調(diào)節(jié))抗體。binding抗體可激活補(bǔ)體,導(dǎo)致AChR缺失,與疾病的臨床嚴(yán)重程度密切相關(guān)。blocking抗體可能損害乙酰膽堿與受體的結(jié)合,導(dǎo)致肌肉收縮不良調(diào)節(jié)抗體引起受體內(nèi)吞作用,導(dǎo)致AChR表達(dá)缺失[6,7]50%MG患者中檢測(cè)到blocking抗體,但與binding抗體滴度相比,blocking抗體滴度與嚴(yán)重程度的相關(guān)性較差[8,9]。常見的方法是檢測(cè)血清AChR binding抗體,該抗體在85%MG患者中出現(xiàn)升高。滴度在MG患者中變化很大,與臨床疾病嚴(yán)重程度相關(guān)性較弱,但在個(gè)別患者中滴度與臨床評(píng)分相關(guān)性較好[10]。本研究的目的是比較AChR binding抗體和blocking抗體對(duì)MG的診斷能力,并評(píng)估MG患者的臨床嚴(yán)重程度


方法


受試者

對(duì)濟(jì)州國立大學(xué)醫(yī)院20061月至201212月期間MG注冊(cè)的患者記錄進(jìn)行了審查。我們分析了44例證實(shí)為MG的患者的抗體類型和病歷納入研究的患者均接受了bindingblocking AChR抗體檢測(cè),且自診斷以來病程超過2。做過bindingblocking其中一種抗體試驗(yàn)的患者,以及被診斷為血清MG陰性的患者被排除在外。根據(jù)美國重癥肌無力基金會(huì)(MGFA)的臨床分類,將患者分為5個(gè)主要類型。在開始研究時(shí),我們通過MGFA分類重新評(píng)估臨床階段。再次根據(jù)MGFA分類將入組患者分為眼肌型全身型。我們比較了眼肌型全身型的抗體類型和滴度以及胸腺狀態(tài)。研究方案由機(jī)構(gòu)審查委員會(huì)審查和批準(zhǔn)。


乙酰膽堿受體自身抗體檢測(cè)

AChR-binding抗體通過免疫沉淀法測(cè)定,該方法使用可溶性AChR125 I-α-環(huán)蛇毒素復(fù)合。乙酰膽堿受體從人體肢體肌肉中溶解于非離子型洗滌劑中,并與125 I-α-環(huán)蛇毒素復(fù)合提供抗原。與患者血清孵育后,加入過量的山羊抗人免疫球蛋白GM??贵w結(jié)合的乙酰膽堿受體-125I-α-環(huán)蛇毒素復(fù)合物將與人類總免疫球蛋白共同沉淀。測(cè)定了洗滌過的沉淀的放射性。AChR-binding抗體滴度大于或等于0.5 nM被認(rèn)為是陽性。


采用放射免疫法檢測(cè)AChR-blocking抗體。樣品與洗滌液溶解的受體在室溫下孵育1小時(shí)。在孵育期間,樣本中的AChR-blocking抗體得以與受體結(jié)合。經(jīng)過孵育,125I-α-環(huán)蛇毒素得以與受體上的剩余結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合。受體隨后與Sepharose-Con A沉淀。離心后,沉淀中含有125I-α-環(huán)蛇毒素。125I-α-環(huán)蛇毒素的含量與原始樣本中AChR-blocking抗體的濃度成反比125I-α-環(huán)蛇毒素結(jié)合的抑制率反映了血清樣本中這些抗體的濃度。AChR-blocking抗體顯示15%或更大的阻斷被認(rèn)為是陽性的。


數(shù)據(jù)分析

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析(版本11.0)。兩組間比較采用卡方檢驗(yàn)和Fisher精確檢驗(yàn)。兩組binding抗體和blocking抗體滴度比較采用Wilcoxon檢驗(yàn),p< 0.05顯著性。


結(jié)果

35例患者符合納入標(biāo)準(zhǔn)。12名患者(35%)為男性,23名患者(65%)為女性。35例患者中,16(47%)同時(shí)具有blockingbinding AChR抗體,11(31%)僅具有binding抗體,8(22%)僅具有blocking抗體類型根據(jù)MGFA分類,我們將35例患者分為510例為種類112例為種類2,7例為種類3,2例為種類44例為種類5(1)。根據(jù)明確的臨床分型,分為眼肌型10例,全身型25。全身型16例患者同時(shí)具有兩種AChR抗體,其余患者僅顯示binding抗體。僅有blocking抗體的患者均來自眼肌型。除了2例患者最初表現(xiàn)為肌無力危象外,大多數(shù)患者最初僅累及眼肌所有患者在最初診斷時(shí)均進(jìn)胸腺CT檢查。胸腺狀況由放射科醫(yī)生評(píng)估,診斷為胸腺增生或胸腺瘤的全身性MG患者接受胸腺切除術(shù)。胸腺增生7例,全身性MG患者胸腺增生6例。在35例患者中,6例發(fā)現(xiàn)胸腺瘤,5例同時(shí)具有兩種AChR抗體類型。6例胸腺瘤MGFA分型的臨床情況如下IIb級(jí)1例,IIIb級(jí)2例,IVb級(jí)2例,V級(jí)1例。胸腺瘤的WHO分型為AB3例,B12例,B31Masaoka級(jí)系統(tǒng)對(duì)胸腺瘤分期的描述見表1同時(shí)具有binding抗體和blocking抗體的MG患者的臨床嚴(yán)重程度高于具有bindingblocking單一抗體的MG患者。全身型的患者平均抗體滴度較高。全身型患者binding抗體和blocking抗體的平均滴度分別為9.32 nmol/L36.43%。眼肌型患者中,binding抗體和blocking抗體的平均滴度分別為2.30 nmol/L15.53%(2)。眼肌型全身型的抗體滴度有顯著性差異(p<0.05)。

 

1 重癥肌無力患者的臨床特點(diǎn)

MGFA臨床分型

特征

I

II

IIa/IIb

III

IIIa/IIIb

IV

IVa/IVb

V

患者數(shù)量

10

12

7

2

4



7/5

2/5

0/2


年齡(中位數(shù),年)

43

46

47

38

34

性別(/)

6/4

8/4

5/2

1/1

3/1

AChR抗體






Binding(n)

2

6/2

1/0

0

0

Blocking(n)

8

0

0

0

0

兩者都有(n)

0

1/3

1/5

0/2

4

胸腺評(píng)價(jià)






正常(n)

9

6/2

2/1

0

2

增生(n)

1

1/2

0/2

0

1

胸腺瘤(n)

0

0/1

0/2

0/2

1

胸腺瘤分級(jí)a



IIIa

IIa

IIb

ACh乙酰膽堿受體,MGFA 美國重癥肌無力基金會(huì)n 患者數(shù)量

a Masaoka級(jí)系統(tǒng)

 

2 眼部重癥肌無力與全身重癥肌無力的比較


眼肌型

全身型

患者數(shù)量

10

25

AChR抗體



Binding(n)

2

9

Blocking(n)

8

0

兩者都有(n)

0

16

抗體滴度



Binding(nmol/L)*

2.3 (0.02-5.19)

9.32 (0.45-16.71)

Blocking(%)*

15.53 (10.34-27.78)

36.43 (2.11-68.95)

胸腺評(píng)價(jià)



正常(n)

9

13

增生(n)

1

6

胸腺瘤(n)

0

6

AChR 乙酰膽堿受體,患者數(shù)量,括號(hào)內(nèi)為抗體滴度范圍

*Wilcoxon檢驗(yàn)比較眼肌型全身型抗體滴度(p<0.05)


討論

AChR抗體檢測(cè)是診斷MG的基礎(chǔ)驗(yàn)證試驗(yàn)。一些研究已經(jīng)檢驗(yàn)了AChR抗體存在的診斷準(zhǔn)確性[11-13]。然而,據(jù)我們所知,很少有研究根據(jù)抗體類型比較臨床嚴(yán)重程度。本研究中我們證明,同時(shí)具有blocking抗體和binding抗體的MG患者預(yù)后更差,并傾向于發(fā)生胸腺瘤。最常見的方法是檢測(cè)血清AChR-binding抗體[14]然而,這種方法不能區(qū)分一般的binding抗體和更具體的modulating人群。此外,binding試驗(yàn)不容易檢測(cè)blocking抗體。它們可以通過直接的空間干涉或變構(gòu)機(jī)制起作用。blocking抗體相關(guān)的病理將導(dǎo)致受體功能最迅速的喪失。有報(bào)道稱疾病嚴(yán)重程度與binding抗體滴度之間存在一定的相關(guān)性,但這種相關(guān)性是可變的,因此binding抗體滴度并不能預(yù)測(cè)個(gè)體患者的預(yù)后[15,16]。

其他檢測(cè)患者血清抑制膽堿能配體(blocking抗體)結(jié)合或誘導(dǎo)AChR(modulating抗體)調(diào)節(jié)能力的方法對(duì)診斷靈敏度的貢獻(xiàn)相對(duì)較小。binding試驗(yàn)中加入blockingmodulating抗體試驗(yàn)可使陽性率提高約10%。據(jù)報(bào)道,blocking抗體通常與binding抗體有關(guān)[8]在沒有binding抗體的MG患者中,AChR-blocking抗體檢測(cè)很少呈陽性我們目前發(fā)現(xiàn)它作為MG的診斷試驗(yàn)有價(jià)值,因?yàn)?/span>binding抗體和blocking抗體之間的陽性率沒有顯著差異通過一種靈敏的方法,我們發(fā)現(xiàn)大多數(shù)MG患者都有blocking抗體。先前關(guān)于這些抗體的報(bào)告顯示由于不同的分析程序而產(chǎn)生不同的結(jié)果。因此,在診斷MG時(shí),兩種抗體檢測(cè)更有助于診斷和預(yù)測(cè)MG患者的預(yù)后。

抗體的致病作用可能并不局限于一種特殊類型的抗體。據(jù)報(bào)道,blocking抗體與MG患者的臨床狀態(tài)并沒有很好的相關(guān)性[8,17]。然而,在我們的研究中,在眼部和輕度全身性MG患者中發(fā)現(xiàn)的更多的是blockingbinding抗體。此外,僅有blocking抗體的患者均來自眼肌型相反,同時(shí)具有binding抗體和blocking抗體的患者傾向于進(jìn)展為全身性MG據(jù)報(bào)道,MG的臨床特征在不同人群之間存在一定的差異,特別是亞洲人和白種人之間。與白種人相比,亞洲人群中,MG似乎較早于兒童期發(fā)病,僅出現(xiàn)眼部癥狀。此外,據(jù)報(bào)道,中國患者的眼MG患病率較高[18]。雖然納入的患者不多,但我們的患者出現(xiàn)眼MG的比例較高。我們推測(cè)亞洲人高比例的眼部MG與抗體類型有關(guān)。

有趣的是,我們的研究揭示了抗體滴度和臨床嚴(yán)重程度之間的顯著相關(guān)性。全身MG患者傾向于有較高的AChR-bindingblocking抗體滴度然而,一些全身型的患者抗體型滴度較低。這些看似矛盾的結(jié)果反映了AChR抗體的特異性、親和性和同型的異質(zhì)性。橫紋肌抗體提示胸腺瘤和更嚴(yán)重的疾病的存在[19]最近的報(bào)道表明,抗KCNA4抗體可能是鑒別胸腺瘤和嚴(yán)重表型患者的有用標(biāo)志物,但還需要進(jìn)一步的證實(shí)[20]。雖然我們沒有檢測(cè)針對(duì)橫紋肌抗原或電壓門控鉀通道的抗體,但我們的研究揭示了胸腺瘤與兩種AChR抗體之間的相關(guān)性。

盡管回顧性研究存在局限性我們的研究表明,同時(shí)具有binding抗體和blocking抗體的MG患者表現(xiàn)出更嚴(yán)重的全身性MG或肌無力危像。全身型的患者往往有較高的bindingblocking抗體滴度。我們建議,這兩種抗體的測(cè)試都有助于確定疾病是否會(huì)普遍化。

參考文獻(xiàn):略


原文:Kang S Y,  Oh J H,  Song S K, et al. Both binding and blocking antibodies correlate with disease severity in myasthenia gravis[J]. Neurological Sciences Official Journal of the Italian Neurological Society & of the Italian Society of Clinical Neurophysiology, 2015, 36(7):1167.

譯:RSRTJ


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