自身抗體的測定在自身免疫病診斷及鑒別診斷中具有重要作用。目前，自身抗體檢測已在國內(nèi)臨床上普遍開展，檢測方法、試劑質(zhì)量、儀器設(shè)備和操作人員等因素直接關(guān)系到檢測結(jié)果及報告質(zhì)量，從而可能影響臨床醫(yī)師對結(jié)果的判斷和解讀。
為提升國內(nèi)自身抗體檢測專業(yè)水平，中國免疫學(xué)會臨床免疫分會在2014年發(fā)布的《自身抗體檢測在自身免疫病中的臨床應(yīng)用專家建議》基礎(chǔ)上，進一步制訂了《自身免疫病診斷中抗體檢測方法的推薦意見》（以下簡稱《意見》）。該《意見》的制訂分三步進行。首先通過檢索國內(nèi)外文獻并結(jié)合中國實際情況起草《意見》草案。草案由中國免疫學(xué)會臨床免疫分會的風(fēng)濕免疫、檢驗、消化、腎內(nèi)、血液、內(nèi)分泌、神經(jīng)內(nèi)科及免疫學(xué)等多學(xué)科專家討論并修改形成初步建議，每一條建議方法均附有基于GRADE法的證據(jù)質(zhì)量分級（分為高，中，低和極低四個級別）。草案提交中國免疫學(xué)會臨床免疫分會專家組進行投票評分，計算所有評分（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）作為每條建議的專家認(rèn)可度，最終經(jīng)進一步修改和完善后定稿。
《意見》制訂標(biāo)準(zhǔn)和評價標(biāo)準(zhǔn)
（一）指標(biāo)和方法學(xué)納入標(biāo)準(zhǔn)
《意見》中涉及的抗體綜合了專家委員會意見討論，均為國內(nèi)普遍使用、具有重要診斷價值的自身抗體以及衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質(zhì)評涉及的自身抗體。參評方法學(xué)為國家藥品監(jiān)督管理局室間質(zhì)評涉及的、國內(nèi)已上市且廣泛使用的以及臨床文獻中的常見方法學(xué)。
（二）參考文獻證據(jù)級別評價標(biāo)準(zhǔn)
參考文獻證據(jù)級別共5級：I級(最高證據(jù))，使用盲法的大樣本（≥200）隨機對照方法學(xué)研究及方法學(xué)薈萃分析；II級，使用盲法的小樣本（<200）隨機對照方法學(xué)研究，或未使用盲法的隨機對照方法學(xué)研究，或采用有效替代標(biāo)志物的隨機對照方法學(xué)研究；III級，應(yīng)用相應(yīng)方法的非隨機對照研究，觀察性（隊列）研究，病例對照研究或橫斷面研究；IV級，專家委員會或相關(guān)的意見；V級，專家意見。
（三）專家評分標(biāo)準(zhǔn)及統(tǒng)計標(biāo)準(zhǔn)
專家認(rèn)可度評分按Delphi評分進行打分，0分表示非常不贊同，10分表示非常贊同（0-2分反對，3-4分不推薦，5-6分酌情推薦，7-8分推薦，9-10分強烈推薦）。統(tǒng)計后評分平均值<7分或未收到半數(shù)以上專家評價的指標(biāo)和對應(yīng)方法學(xué)視為抗體檢測方法學(xué)未形成共識予以排除。《意見》打分表發(fā)出48份，收回38份，有效38份。
自身抗體檢測方法專家認(rèn)可度評分和專家， 推薦
（內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病相關(guān)自身抗體）
《意見》中，對內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病相關(guān)自身抗體包括甲狀腺疾病相關(guān)自身抗體、糖尿病相關(guān)自身抗體檢測的推薦方法，見下表。
甲狀腺疾病相關(guān)自身抗體：作用靶器官為甲狀腺，是自身免疫性甲狀腺疾病的重要診斷依據(jù)。
抗甲狀腺過氧化物酶抗體（TPOAb）：與抗甲狀腺球蛋白抗體聯(lián)合檢測是診斷自身免疫性甲狀腺炎的重要依據(jù)。建議采用化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）或酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA）檢測。
抗甲狀腺球蛋白抗體：主要用于疑似橋本甲狀腺炎患者的診斷，常與TPOAb同時檢測，也可作為產(chǎn)后甲狀腺炎、無痛性Graves病等甲狀腺疾病診斷的參考指標(biāo)。建議檢測方法是CLIA或ELISA。
抗促甲狀腺激素受體抗體：是Graves病診斷標(biāo)志，靈敏度約為90%，特異度可達99%，并且抗體水平還可作為預(yù)后和治療的重要參考。建議采用CLIA、電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）或ELISA檢測。
糖尿病相關(guān)自身抗體：識別胰島β細胞不同抗原成分，是評估胰島β細胞是否存在免疫損害及疾病診斷分型的重要指標(biāo)。
抗胰島細胞抗體（ICA）：用于確診1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）。ICA分析結(jié)果受不同的胰腺組織、標(biāo)記方法、孵育時間、濕度以及不同生物學(xué)家的解釋等因素影響波動較大，因此ICA是檢測難度最大且方法學(xué)難以標(biāo)準(zhǔn)化的胰島自身抗體。建議選以靈長類胰腺冰凍組織切片為基質(zhì)的間接免疫熒光法（IIFT）檢測，也可采用ELISA檢測。
抗酪氨酸磷酸酶（IA2）抗體：胰島自身免疫活動的早期標(biāo)志物，可作為T1DM、成人隱匿性自身免疫性糖尿病（LADA）的血清學(xué)診斷指標(biāo)?？笽A2抗體的出現(xiàn)預(yù)示病情進展迅速，對T1DM診斷、預(yù)測及治療監(jiān)控有重要臨床意義。建議采用CLIA、ELISA或放射免疫分析法（RIA）檢測。
抗谷氨酸脫羧酶（GAD）抗體：出現(xiàn)早且持續(xù)時間長，是診斷T1DM和LADA最敏感的免疫指標(biāo)，在年齡較大T1DM兒童患者和遲發(fā)型患者中多見，在神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病中也可起到輔助診斷的作用。GAD抗體水平在LADA患者中可反映病程及胰島素分泌功能的衰退情況，高抗體水平的LADA患者應(yīng)及早進行胰島素治療以保留殘存β細胞功能。對T1DM、LADA擬診患者建議采用ELISA或線性免疫印跡（LIA）檢測。其中ELISA法檢測抗谷氨酸脫羧酶抗體的優(yōu)異性能擁有I級(最高證據(jù))數(shù)據(jù)支持。
抗胰島素抗體（IAA）是T1DM的免疫學(xué)指標(biāo)之一，在2型糖尿病（T2DM）患者中陽性率較低，也見于部分甲狀腺疾病。建議采用CLIA或ELISA檢測，應(yīng)注意現(xiàn)有檢測方法不能區(qū)分疾病相關(guān)的IAA還是因注射外源性胰島素而產(chǎn)生的IAA。
拓展閱讀-抗GAD抗體
抗谷氨酸脫羧酶抗體是自身免疫糖尿病中最常見的抗體，醫(yī)院的內(nèi)分泌科和檢驗科均廣泛開展了該抗體檢測項目。由于放射性核素在應(yīng)用層面上受限制，科室更青睞于選擇非核素類檢測方法，如免疫印跡法、ELISA、CLIA等。2015年，黃干等學(xué)者開展了初次“中國胰島自身抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)化計劃”，20家參比單位中選擇非核素類檢測法的比例高達70%，而在能夠?qū)崿F(xiàn)全定量的非核素檢測法中，ELISA更是占據(jù)半壁江山（下表）。
對于GAD抗體檢測的來說，基于的設(shè)計原理不同，ELISA法試劑盒的性能會有差異。由佛羅里達大學(xué)牽頭開展的國際多中心自身免疫糖尿病抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)化項目(ISAP)中，橋聯(lián)ELISA法的檢測性能*佳。雙抗原夾心橋聯(lián)ELISA法是傳統(tǒng)酶標(biāo)二抗間接ELISA法的升級，借助生物素-鏈霉親和素等信號放大系統(tǒng)和抗原空間位點的充分暴露，大大提高了對GAD65抗體的檢測靈敏度，使橋聯(lián)ELISA法可作為傳統(tǒng)放射免疫法的替代方案。
在另一項來自英國的隊列研究中，RSR的橋聯(lián)ELISA檢測試劑盒也實現(xiàn)了GAD65抗體實驗室檢測方法的大幅升級：
該隊列研究納入了2006至2012年羅姆福德queen醫(yī)院和royal倫敦醫(yī)院兩家兒童糖尿病中心的316名兒童糖尿病患者，經(jīng)至少兩項自身抗體檢測后296名(93.7%)兒童確診為1型糖尿病。
在GAD抗體檢測中，2011年12月前入組患者使用實驗室自建檢測法(ELISA和猴小腦切片間接免疫熒光），陽性率分別為18.4%和13.8%。2012年1月改用RSR 橋聯(lián)ELISA法檢測試劑盒后，抗體陽性率提升至66.7%。可見，RSR橋聯(lián) ELISA試劑盒的靈敏性遠超實驗室方法。
總結(jié)
作為對2014 年版《自身抗體檢測在自身免疫病中的臨床應(yīng)用專家建議》的全面修訂，2020年版《推薦意見》涵蓋了內(nèi)分泌系統(tǒng)自身免疫疾病等多系統(tǒng)自身免疫疾病自身抗體的檢測方法學(xué)推薦，可作為臨床醫(yī)師和檢驗人員選擇自身抗體檢測方法學(xué)的參考。以橋聯(lián)ELISA為代表的RSR產(chǎn)品除服務(wù)于甲狀腺自身免疫領(lǐng)域外，在自身免疫糖尿病領(lǐng)域已實現(xiàn)對傳統(tǒng)放射免疫法和實驗室非標(biāo)準(zhǔn)化方法的全面替代，可作為內(nèi)分泌科特檢實驗室和檢驗科的高效選擇。
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參考文獻：
1. 中國免疫學(xué)會臨床免疫分會專家組. 自身免疫病診斷中抗體檢測方法的推薦意見[J]. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志 2020年43卷9期, 878-888頁, ISTIC PKU CSCD CA, 2020.
2. 黃干, 楊濤, 劉煜, 等. 中國胰島自身抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)化計劃報告：檢測方法調(diào)查及準(zhǔn)確性評估 [J] . 中華糖尿病雜志,2016,8 (12): 723-728.
3. Perchard R, MacDonald D, Say J, et al. Islet autoantibody status in a multi-ethnic UK clinic cohort of children presenting with diabetes. Arch Dis Child. 2015;100(4):348-352.
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